液氮研磨如何操作?先了解一下液氮研磨原理吧!
液氮容器的準備
液氮一般保存于
液氮罐中,。實驗前先準備一個保溫桶，將適量液氮轉(zhuǎn)移至保溫桶中，同時還要準備一個不銹鋼或塑料湯勺,，湯勺的柄不夠長時要想辦法加長，以免凍傷手,。
組織的處理及用量
任何組織在獲得后如不立即使用,，要盡快保存在低溫環(huán)境中(一196℃液氮中速凍，一70℃保存),。使用時,，植物組織應當先用自來水清洗外表的泥沙，用單蒸水沖洗兩遍,，用75%乙醇浸洗約30秒,，再用滅菌雙蒸水沖洗兩遍，用無菌濾紙吸干,，然后根據(jù)需要取適當部位的組織,。動物組織不必清洗，但要盡量剔除周邊的組織及血塊,。組織的取量要比實際需要量大1一2倍,，因為研磨時部分組織會粘在研缽和研棒上，會致部分組織樣本丟失,。
研缽的固定
我們在實驗時發(fā)現(xiàn),，研缽在加液氮后溫度很低，外表會形成許多冰晶,，用力研磨組織時易打滑,，研缽內(nèi)的組織液氮混合物很容易濺出，造成組織丟失,，也容易凍傷手,。如果在研缽下墊些紗布或濾紙，雖不易滑動,，但由于緩沖作用,，研磨時不受力，不足取,。后來我們作了如下改進:一是做個木支架,，即選一塊厚約兩寸的木板，在上面挖個半球形圓洞(大小根據(jù)研缽大小而定),，木板兩端留一定長度以備手握之用,，使用時將研缽卡在半球形洞中，既穩(wěn)當又不會凍傷手;二是備一條干凈的毛巾或紗布(干的),，折成長條形,，將研缽包圍起來,，兩端合并后用手抓住，這個方法簡單實用,，但要特別小心,，以免凍傷。
液氮罐
研磨方法
空缽先用液氮預冷,，再將研棒的上端用紗布包裹(用力時手不會痛),，組織**切成薄片，研磨時不易濺出,，也更容易磨碎,，研棒**頂著手心，這樣便于用力,。研磨過程中要避免液氮干涸,，研磨至細粉即可。待液氮剛蒸發(fā)完時,，用一個小藥勺取出所需用量進行下一步實驗,，或者將組織粉末裝人容器內(nèi)，保存于一70℃的溫度下,，以備下一步實驗用,。使用得當?shù)囊旱心ソM織法，將為下一步實驗成功奠定了基礎,。值得一提的是,，操作中所有接觸的器皿及耗材須清洗干凈并消毒。如果研磨組織用于提取RNA時,，使用的器皿及耗材必須采用焦碳酸二乙醋(DEPC)滅活RNase并進行高壓消毒處理,。
