細(xì)胞分離：
外周血用電動助吸器按照每管不多于35ml,，平均分至50ml離心管中,，931×g,，離心8min，吸取上層血漿至50ml離心管中,，取1.5ml于EP管中，標(biāo)記,，－80℃保存,。用NA稀釋血細(xì)胞，使得血細(xì)胞:NA為1：1,，混勻后均勻緩慢地加至相應(yīng)的A液上層，形成完整的界面,。596×g,，離心20min?？梢娒黠@分層,。吸棄第1層上清，小心輕柔地將第2層的白色細(xì)胞層分別吸至不同的潔凈50ml離心管中,。分別向各管中加NA,，稀釋混勻，定容至40ml/管,。931×g,，離心8min。吸棄上清,，加NA重懸細(xì)胞,。凍存處理前留取細(xì)胞懸液計數(shù)和活力測定。
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細(xì)胞冷凍保存
純化后細(xì)胞重懸于含終濃度9.8%的等體積DMSO2ml和右旋糖苷的冷凍保存液中,，冷凍保護(hù)液配置成2組（1組含80%的無血清培養(yǎng)液,，另1組含80%自體血漿）輕輕混勻后置－20℃冰箱冷卻平衡5－15min到4℃以下，同時把凍存管放4℃冰箱平衡15min,。分裝入2ml凍存管內(nèi),，每管1ml，管壁做好標(biāo)識,。放在樣本凍存盒,，轉(zhuǎn)移至程序降溫盒儀器，最終將細(xì)胞保存于－196℃液氮內(nèi),。
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